沉默环状RNA_0084043对高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤的影响

张林波; 庞紫蕊

doi:10.3969/j.issn.1671-2390.2022.09.010

沉默环状RNA_0084043对高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤的影响

Effect of circ_0084043 silence upon human renal tubular epithelial cell injury induced by high glucose

摘要

摘要: 目的探讨沉默环状RNA_0084043（circular RNA_0084 043，circ_0084043）对高糖诱导的人肾小管上皮细胞炎性反应、氧化应激及凋亡的影响及其对微小RNA-142-5p （micro RNA-145-5p，miR-142-5p）的靶向调控作用。方法肾小管上皮细胞HK-2按照随机数字表法随机分为Con组、HG组、HG+si-NC组、HG+si-circ_0084043组、HG+miR-NC组、HG+miR-142-5p组、HG+si-circ_0084043+anti-miR-NC组、HG+si-circ_0084043+anti-miR-142-5p组；qRT-PCR法检测circ_0084043与miR-142-5p的表达量；ELISA法检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素8（interleukin-8，IL-8）的水平；试剂盒检测丙二醛（malondialedhyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的水平；流式细胞术检测细胞凋亡率；双荧光素酶报告基因实验检测circ_0084043与miR-142-5p的靶向关系；Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bcl-2-associated X protein，Bax）蛋白表达量。结果与Con组比较，HG组circ_0084043的表达水平升高（1.00±0.04）比（3.57±0.49）（P<0.05），miR-142-5p的表达水平降低（1.00±0.05）比（0.34±0.06）（P<0.05），TNF-α、IL-8、MDA的水平升高（18.43±2.06） mg/mL比（49.55±2.65） mg/mL；（11.74±0.83） mg/mL比（27.62±2.25） mg/mL；（0.23±0.08） nmol/mg比（2.86±0.37） nmol/mg（P<0.05），凋亡率（6.74±0.95）%比（23.15±2.49）%与Bax蛋白水平升高（P<0.05），SOD的活性降低（40.05±3.07） U/mg比（17.35±1.54） U/mg（P<0.05），Bcl-2蛋白水平降低（P<0.05）；与HG组、HG+si-NC组比较，HG+si-circ_0084043组TNF-α、IL-8、MDA的水平降低（49.55±2.65）/（48.42±4.04） mg/mL比（34.90±4.95） mg/mL；（27.62±2.25）/（27.76±3.53） mg/mL比（19.14±1.02） mg/mL；（2.86±0.37）/（2.81±0.43） nmol/mg比（0.89±0.12） nmol/mg（P<0.05），凋亡率（23.15±2.49）/（23.73±3.28）%比（14.47±0.93）%与Bax蛋白水平降低（P<0.05），SOD的活性（17.35±1.54）/（17.40±0.63） U/mg比（28.54±2.56） U/mg升高（P<0.05），Bcl-2蛋白水平升高（P<0.05）；circ_0084043可靶向调控miR-142-5p；与HG+miR-NC组比较，HG+miR-142-5p组TNF-α、IL-8、MDA的水平降低（48.78±4.56） mg/mL比（35.18±3.93） mg/mL；（27.98±1.64） mg/mL比（18.31±1.11） mg/mL；（2.81±0.32） nmol/mg比（0.96±0.08） nmol/mg（P<0.05），凋亡率（22.27±2.68）%比（16.01±0.48）%与Bax蛋白水平降低（P<0.05），SOD的活性升高（17.40±1.09） U/mg比（25.22±1.67） U/mg（P<0.05），Bcl-2蛋白水平升高（P<0.05）；与HG+si-circ_0084043+anti-miR-NC组比较，HG+si-circ_0084043+anti-miR-142-5p组TNF-α、IL-8、MDA的水平升高（34.74±1.51） mg/mL比（46.31±2.65） mg/mL；（19.03±0.66） mg/mL比（23.07±1.19） mg/mL；（0.89±0.06） nmol/mg比（1.43±0.11） nmol/mg（P<0.05），凋亡率（14.69±0.49）%比（18.37±0.89）%与Bax蛋白水平升高（P<0.05），SOD的活性降低（28.38±1.03） U/mg比（19.56±0.83） U/mg（P<0.05），Bcl-2蛋白水平降低（P<0.05）。结论沉默circ_0084043可通过负向调控miR-142-5p而抑制细胞炎性反应、氧化应激及凋亡，从而减轻高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤。

Abstract: Objective To explore the effect of silencing circular RNA_0084043(circ_0084043) on the inflammatory responses, oxidative stress and apoptosis of human renal tubular epithelial cells induced by high glucose and its targeted regulation of miR-142-5p. Methods Renal tubular epithelial cells HK-2 were divided into the groups of Con, HG, HG+si-NC, HG+si-circ_0084043, HG+miR-NC, HG+miR-142-5p, HG+si-circ_0084043+anti-miR-NC and HG+si-circ_0084043+anti-miR-142-5p. Quantitative realtime polymerase chain reaction(qRT-PCR) was utilized for detecting the expression levels of circ_0084043 and miR-142-5p according to the random number table Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) was utilized for detecting the levels of tumor necrosis factor-alpha(TNF-α) and interleukin-8(IL-8). The levels of malondialedhyde(MDA) and superoxide dismutase(SOD) were detected. Flow cytometry was employed for detecting apoptotic rate. Dual luciferase reporter gene was utilized for detecting the targeting relationship between circ_0084043 and miR-142-5p and Western blot for detecting the expressions of Bcl-2 and Bax protein. Results As compared with Con group, the expression level of circ_0084043 spiked in HG group(1.00±0.04) vs(3.57±0.49)(P<0.05) while the expression level of miR-142-5p declined(1.00±0.05) vs (0.34±0.06) (P<0.05);the levels of TNF-α, IL-8 and MDA(18.43±2.06) vs(49.55±2.65) mg/mL; (11.74±0.83) vs(27.62±2.25) mg/mL; (0.23±0.08) vs(2.86±0.37) nmol/mg(P<0.05), apoptotic rate(6.74±0.95)% vs(23.15±2.49)%and protein level of Bax increased(P<0.05) while activity of SOD decreased(40.05±3.07) vs(17.35±1.54) U/mg (P<0.05) and protein level of Bcl-2 dropped(P<0.05). Compared with HG/HG+si-NC group, the levels of TNF-α, IL-8 and MDA declined in HG+si-circ_0084043 group(49.55±2.65)/(48.42±4.04) vs(34.90±4.95) mg/mL; (27.62±2.25)/(27.76±3.53) vs(19.14±1.02) mg/mL; (2.86±0.37)/(2.81±0.43) vs (0.89±0.12) nmol/mg(P< 0.05) and apoptotic rate(23.15±2.49)/(23.73±3.28)% vs(14.47±0.93)%and protein level of Bax declined(P<0.05) while the activity of SOD(17.35±1.54)/(17.40±0.63) vs(28.54±2.56) U/mg (P<0.05) and protein level of Bcl-2 rose(P<0.05). And circ_0084043 could target miR-142-5p. As compared with HG+miR-NC group, the levels of TNF-α, IL-8 and MDA declined in HG+miR-142-5p group(48.78±4.56) vs(35.18±3.93) mg/mL; (27.98±1.64) vs(18.31±1.11) mg/mL; (2.81±0.32) vs(0.96±0.08) nmol/mg(P<0.05) and apoptotic rate(22.27±2.68)% vs(16.01±0.48)% and protein level of Bax dropped(P<0.05) while activity of SOD(17.40±1.09) vs(25.22±1.67) U/mg(P<0.05) and protein level of Bcl-2 rose(P<0.05). As compared with HG+si-circ_0084043+antimiR-NC group, the levels of TNF-α, IL-8 and MDA rose in HG+si-circ_0084043+anti-miR-142-5p group(34.74±1.51) vs(46.31±2.65) mg/mL; (19.03±0.66) vs(23.07±1.19) mg/mL; (0.89±0.06) vs(1.43±0.11) nmol/mg (P<0.05) and apoptotic rate(14.69±0.49)% vs(18.37±0.89)%and protein level of Bax spiked(P<0.05) while the activity of SOD(28.38±1.03) vs(19.56±0.83) U/mg (P<0.05) and protein level of Bcl-2 declined(P<0.05). Conclusion Silencing circ_0084043 could inhibit cell inflammatory responses, oxidative stress and apoptosis through negatively regulating miR-142-5p, thereby blunting the damage of human renal tubular epithelial cells induced by high glucose.

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